Antes que Ponce de León, había explorado esta región el vasco Ortiz de de Matienzo. En las expediciones de Ponce de León (1513 y 1521) intervienen también elementos vascos: los pilotos Juan Pérez de Urtibia y Juan M. Eguiluz. En la de Hernando de Soto (1539), en plan de conquista y colonización, iban también vascos. Pedro de Añasco que había ido al Perú con Alvarado, aparece en esta expedición. Hernando de Soto empleó en ella toda su fortuna, la parte que le tocó en el reparto del tesoro de Atahualpa, más de 17.000 onzas de oro. Su base de operacionesera Cuba, donde quedaba como gobernadora su mujer Isabel de Bobadilla. Soto murió después de muchas penalidades, a orillas del Misissippi. Algunos de sus compañeros lograron sobrevivir y después de recorrer extensas comarcas bajaron por el Misissippi llegando a las costas de Méjico en 1543.
La expedición del general Pero Menéndez de Avilés (1565-1566) lleva también elementos vascos. En una de sus cartas al rey (Florida, II de septiembre de 1565) da una lista de sus capitanes. De nueve que nombra, seis llevan apellido vasco: Diego de Amaya, Pedro Larrandia, Francisco Múgica, Martín Ochoa y Francisco Recalde. Dice además: "También entre esta gente y la que ha de venir de Vizcaya, muchos caballeros bisoños y otros buenos soldados". En otra carta (Matanzas, 5 de diciembre de 1565), dice refiriéndose a sus luchas con los franceses "luteranos" en Florida y su rendición: "y ansi se vinieron todos, sinó fue el que habían elegido por capitán y tres o cuatro que todos eran navarros, criados del príncipe de Condel" (Colección de Diarios y Relaciones para la Historia de los Viajes y Descubrimientos II. Instituto Histórico de Marina). En esta expedición se fundó la ciudad de San Agustín. En estas tierras, que abarcaban extensos territorios fuera de la Florida propiamente dicha, hubo un gobernador vasco, Domingo Martínez de Abendaño y un misionero, P. Fray Francisco de Berascola, de Gordexola (Bizkaia), martirizado por los indios en 1599.