Exodo de Asunción a Santa Cruz de la Sierra, Alto Perú, hoy Bolivia. Organizado por Pedro Fernández de Vergara y el obispo de la Torre y Chaves, en 1564, a ocho años de la muerte de D. Mz. de Irala. Este acto históricamente poco claro, podría llevar consigo la destrucción del Paraguay de Irala. Pero en 1568 Pedro de Garay, con más sentido de gobernante, organiza y dirige la vuelta a Asunción de la mayoría de los emigrantes, estableciéndose de nuevo en la capital paraguaya. Juan Oitiz de Zárate, gobernador del Río de la Plata, de viaje a España para su confirmación en el cargo, intentó cambiar el nombre Río de la Plata por Nueva Vizcaya y que los pobladores se llamaran vizcaínos. En 1574 llegó Ortiz de Zárate muriendo envenenado en Asunción (?). Juana de Zárate, heredera de todos los títulos de su padre, se casó en Chuquisaca con el oidor Juan Torres de Vera, que designó a Juan de Garay teniente de gobernador (1578) encargándole la repoblación de Buenos Aires.